一、实验目的:

1. 了解高效液相色谱仪原理;
2. 学习高效液相色谱仪的基本操作方法;
3. 利用高效液相色谱仪测定邻苯二甲酸酯、邻苯二乙酸酯、邻苯二丁酸酯的峰图和含量。

二、实验原理:

高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。高效液相色谱法有“四高一广”的特点:高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
在高效液相色谱中,若采用非极性固定相,如十八烷基键合相,极性流动相,即构成反相色谱分离系统。反之,则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低,应用也更为广泛。
定量分析时,为便于准确测量,要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度(R)的计算公式为:

R= 2[t(R2)-t(R1)] /1.7*(W1+W2)

//式中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间;t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间; W1及W2为此相邻两峰的半峰宽。 除另外有规定外,分离度应大于1.5。

== ②== 本实验对象为邻苯二甲酸酯,又称酞酸酯,缩写PAE,常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品,如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。 但研究表明,邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用,是一类内分泌干扰物。同时也有一定的致癌作用。
如果要检测不同条件对谱图分离的影响,可按表1配制几种物质的混合溶液,在不同条件下进行HPLC分离检测。

三.仪器与试剂

==1、==仪器
Agilent 1100高效液相色谱仪,50uL微量注射器。
== 2、==试剂
甲醇(色谱专用),高纯水,样品。

四. 实验部分

1、 仪器与试剂
Surveyor高效液相色谱仪(ThermoFinnigan),
PDA检测器。
邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、
邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、
邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、
邻苯二甲酸二异辛酯(DIOP)均为分析纯试剂;
甲醇、乙醇为色谱纯;
所用水为二次蒸馏水。
2、 色谱条件
色谱柱:Nucleosil2C8,416×250mm,5μm。流动相为甲醇2水体系,梯度洗脱(见表1)。流速110mL/min,检测波长225nm,进样量5μL。
3、 标准曲线的制备
准确称取邻苯二甲酸二丁酯0.10 g溶于10-100 mL甲醇, 配成质量浓度均为1.00×10(4)mg/L的标准液, 再逐级用甲醇稀释至所需的浓度, 备用。
4、 塑料样品前处理
准确称取0.50g塑料食品包装袋,剪成碎片放入具塞锥形瓶中,加入无水乙醇,放置24h,超声提取, 然后水浴蒸发浓缩至10.00mL,提取液用0.45μm有机相滤膜过滤,进行HPLC分析。

(五)思考题
(1) 请分析实验结束后,怎样清洗柱子。分为两种情况,第一种情况为流动相用到缓冲溶液,第二种情况为流动相不用缓冲溶液?
(2) 流动相在使用前为什么要用砂芯漏斗过滤?